DAPI溶液配制以及DAPI溶液使用方法：

---

1. DAPI 產品介紹：
DAPI (28718-90-3,DAPI Dihydrochloride)是一種熒光 DNA 染料，可與雙鏈 DNA 的小溝結合，優先選擇富含腺嘌呤和胸腺嘧啶 (AT) 的 DNA。 DAPI 常用于顯微鏡和流式細胞術。 DAPI 可用于固定細胞或活細胞，盡管它在活細胞中的跨膜效率較低并且需要使用更高的濃度。采用DAPI配制 DAPI染色液：濃度為5 mg/ml，推薦工作濃度為0.5-10μg/ml。
備注：DAPI溶解度

• DMF: 0.2 mg/ml
• DMSO: 3 mg/ml
• Ethanol: 0.2 mg/ml

---

2. DAPI溶液一般使用：ddH2O配制，溶液的濃度為 5mg/ml，推薦DAPI溶液工作濃度為0.5-10μg/ml之間。DAPI，也被稱為：DAPI dihydrochloride，DAPI是一種可穿透細胞膜的藍色熒光染料，與雙鏈DNA進行結合以后，可產生比 DAPI 自身強超過20倍的熒光。與傳統的 EB (溴化乙錠，ethidium bromide)進行比較，DAPI 對雙鏈DNA 的染色靈敏度要比EB的染色靈敏度高很多倍。因 DAPI 是含有特定 AT序列DNA 的一種嵌入劑，DAPI 可以像 Hoechst染料 一樣粘附在DNA雙螺旋的小溝區上。
雖然 DAPI 不能通過活細胞膜，但 DAPI 可以穿透擾亂的細胞膜而對核進行染色。DAPI 具有較高的光漂白承受能力，可以用于檢測 酵母線粒體DNA，病毒DNA，葉綠體DNA，microplasm DNA 及 染色體DNA。DAPI與DNA偶聯物的激發和發射波長分別為：360nm/460nm。
DAPI染色實驗經常應用于細胞凋亡檢測，流式細胞儀檢測以及染色后用熒光顯微鏡觀察等。當然 DAPI 也用于普通 細胞核染色 及特定情況下雙鏈DNA的染色使用。

---

3. DAPI 結構式:

---

4. DAPI溶液 使用步驟：
a. 取1mg的DAPI粉末，離心使粉末沉積在保存管底，后取1mL 的ddH2O將 DAPI粉末溶解，可以制備出 2.9mM的DAPI溶液（1mgDAPI/1mL H2O）。 備注：※ 不使用的制備液需要按照每次試驗需求量分裝存儲，以免反復凍融對試劑活性造成影響；
※ DAPI 不可以用 PBS緩沖溶液或者其他緩沖液直接進行溶解，需要先用水將其溶解。 
b. 取需要量的 DAPI溶液 加入 PBS緩沖液中，制得 10~50µM的 DAPI溶液。
※ 可選擇采用以下方法配制 PBS緩沖液： 稱取：8.00g NaCl，0.20g KCl，0.2g KH2PO4以及2.9g Na2HPO4·12H2O，溶于1L純水中制得。 
c. 量取 1/10培養基體積 的 DAPI溶液 加至細胞培養基里，當然也可采取 1/10濃度 的 DAPI緩沖液 替代培養基。
d. 在37℃恒溫條件下，培養細胞約10~20分鐘，可根據實驗調節培養時間。
e. 之后再用 PBS緩沖液 或其他 適合的緩沖液 對細胞清洗2-3次。
f. 最后使用熒光顯微鏡進行觀察細胞，熒光顯微鏡需帶有 360nm激發波長和460nm發射波長的濾光片的。

---