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AEBSF(DFP,PMSF無毒替代物)

Release Time:2022-10-01

AEBSF介紹:
AEBSF是一種不可逆的絲氨酸蛋白酶抑制劑。AEBSF已被證明抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、纖溶酶、激肽釋放酶和凝血酶。它通過酶活性部位的酰化來抑制。作為PMSF和DFP的替代品,AEBSF具有更低的毒性、更好的水溶性和更好的水溶液穩定性。AEBSF已用于細胞培養,濃度高達0.25mM。水溶液在pH值5-6之間穩定;pH 7.5以上的有限穩定性。
AEBSF的優點
※ AEBSF已被證明抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、纖溶酶-激肽釋放酶和凝血酶。作為PMSF和 DFP替代品,AEBSF具有更低的毒性、更好的水溶性和更好的水溶液穩定性。
※ 苯基甲烷磺酰氟(PMSF)和二異丙基氟磷酸鹽(DFP)的緩蝕常數相似。
常用蛋白酶抑制劑:
AEBSF抑肽酶PMSFEDTA
AEBSF案例:

絲氨酸蛋白酶抑制劑AEBSF阻斷DNA損傷誘導的細胞凋亡,但不阻斷TNFa觸發的細胞凋亡。(a)添加Etoposide (足葉乙甙)后在指定時間點采集的IGRmyc-3細胞的全細胞裂解物的蛋白質印跡。細胞在沒有或存在10mm Z-VAD-FMK或400mm AEBSF的情況下處理。上部用識別全長和裂解PARP的抗體培養,下部用裂解caspase-3的抗體培養。標記p20和p17亞單位。(b)如圖所示,用8 Gy照射IGRmyc-3細胞或用TNF a處理。通過Western blotting測定全長PARP(b)和裂解PARP(v)。(c)使用底物DEVD-AFC測定DEVDase活性。左部分代表了三個獨立的實驗,即在指定的時間段內用足葉乙甙處理IGRmyc-3細胞,無論是否預處理400 m m AEBSF。右側代表用TNF a處理16小時的IGRmyc-3細胞,無需預處理,或用10 m m zVAD–fmk或400 m m AEBSF預處理。該圖至少可以代表兩個獨立的實驗。(d)如圖所示,在AEBSF(mm)和/或10 mm Z-VAD-FMK濃度增加的情況下,IGRmyc-3細胞未經處理或用足葉乙甙處理24或32小時。24小時和32小時PI陽性未處理細胞的百分比分別為17%和14%。從相應的 足葉乙甙 處理樣品中減去在沒有足葉乙苷的情況下培養的PI陽性細胞的背景百分比。(e)在不存在或存在所示抑制劑的情況下,用 足葉乙甙 處理IGRmyc細胞。3小時后,刷新培養基和抑制劑,培養細胞1周。通過Giemsa溶液染色觀察細胞。左面板顯示了在六孔板中培養的細胞的照片。右邊的面板顯示了放大50倍的相同細胞培養物的顯微照片

 
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