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熒光素鉀鹽使用說明

Release Time:2023-07-20
熒光素鉀鹽使用說明:
D-熒光素鉀鹽(K+)設計用于體外和體內(nèi)生物發(fā)光測定。D-熒光素鉀鹽一般為黃綠色,激發(fā)波長為494nm,發(fā)射波長為521nm。D-熒光素的質量和純度對于獲得良好和可重復的結果至關重要。BIOFOUNT可提供高質量的無內(nèi)毒素D-熒光素K+鹽
二、D-熒光素鉀鹽的使用方法:

1. 溶液的制備
D-熒光素鉀鹽的溶液可以用于染色、標記、檢測等多種應用。
制備D-熒光素鉀鹽溶液的方法:
a.首先稱取適量的D-熒光素鉀鹽,加入適量的去離子水中后進行均勻攪拌;
b.使用過濾膜將溶液過濾,除菌。
c.將D-熒光素鉀鹽溶液調節(jié)至所需要的濃度。

2. 染色實驗過程
D-熒光素鉀鹽可以用于細胞染色、組織染色等染色實驗,實驗方法如下:
a.首先將細胞或組織樣本固定在載玻片上。
b.然后加入適量的D-熒光素鉀鹽溶液,使試劑溶液可以覆蓋樣本。
c.在黑暗條件下可以孵育一段時間,使D-熒光素鉀鹽充分滲透入細胞或組織中。
d.使用PBS緩沖液洗滌樣本,去除多余的D-熒光素鉀鹽。
e.在顯微鏡下觀察樣本,觀察樣品的熒光信號。

3. 實驗標記
D-熒光素鉀鹽也可以用于標記蛋白質、核酸等生物分子。
實驗標記方法:
a.首先將蛋白質或核酸與d-熒光素鉀鹽共同孵育。
b.再用凝膠電泳等方法分離標記后的生物分子。
c.最后在熒光顯微鏡下觀察標記后的生物分子即可。

4. 檢測方法
D-熒光素鉀鹽可用于檢測生物分子的存在和濃度。
D-熒光素鉀鹽檢測方法:
a.將d-熒光素鉀鹽與待檢測的生物分子進行共同孵育。
b.用凝膠電泳等方法分離孵育后的混合物。
c.在熒光顯微鏡下觀察熒光信號,即可判斷生物分子的存在和濃度。
1.說明
1.1.簡介及特點
祝賀您購買了BIOFOUNT的D-熒光素鉀鹽產(chǎn)品!
D-熒光素,鉀鹽是一種合成螢火蟲熒光素。這種高純度、無內(nèi)毒素的產(chǎn)品
非常適合體外和體內(nèi)生物發(fā)光測定。高質量的基板消除了可能由于內(nèi)毒素的存在而干擾測定。中性條件下的正確包裝確保了產(chǎn)品的完整性和穩(wěn)定性。這種螢光素酶的水溶性基質是現(xiàn)成的,易于使用。
主要特點有:
•高純度>99.5%
•溶解性好,靈敏度高
•用于生物發(fā)光測定的可靠體內(nèi)報告基因
•不含內(nèi)毒素(非常適合體內(nèi)應用)
•適用于體外實驗
•易于使用
•在整個動物體內(nèi)快速和更容易分布
-熒光素,鉀鹽:
−化學名稱:4,5-二氫-2-(6-羥基-2-苯并噻唑基)-4-噻唑羧酸鉀鹽
−分子式:C11H7N2O3S2K
−分子量:318.42 g/mol
−CAS編號:115144-35-9
−分子結構:
−分子生物學等級和高級純度:99.7%純度。通過九個獨立標準驗證質量包括HPLC和FTIR。
1.2穩(wěn)定性和儲存
※ D-熒光素對光、氧氣和水分敏感,呈粉末狀和溶液狀。
※ 儲存(粉末)收到并長期使用后,將粉末儲存在密閉的干燥容器,-20°C。D-熒光素在-20℃下至少穩(wěn)定一年干燥和中性氣體條件。
※ 如果裝有D-熒光素粉末的瓶子必須反復打開和關閉,建議用惰性物質填充小瓶氣體(氬氣或氮氣)。
※ 儲存(溶液)D-熒光素儲備溶液可以在水中或D-PBS中制備,然后在-20°C下冷凍或優(yōu)選在-80°C下。D-熒光素溶液的穩(wěn)定性是相當有爭議的
※ 解決方案:盡管存在以上問題,冷凍的D-熒光素溶液(-80°C)仍然適合使用,D-熒光素是在低pH(<6.5)和高pH(>7.5)下相當不穩(wěn)定。為了避免重復的冷凍和解凍循環(huán),我們建議用小管等分D-Luciferin溶液,并將其儲存在-80°C下。
2.應用
※ 活細胞、組織和動物模型中的生物發(fā)光測定
※ 螢光素酶報告基因測定
※ 全動物成像(體內(nèi)和體外基因測定)
※ 熒光素酶基因實驗
※ ATP測定(螢光素酶催化ATP轉化為AMP)和免疫測定
※ 焦磷酸測序
※用于序列基因分析實驗
3. 以下是D-熒光素鉀鹽可以快速實現(xiàn)非常高的生物發(fā)光信號的使用指南。最佳使用條件因:動物、細胞培養(yǎng)、給藥途徑以及測定靈敏度而異。D-熒光素的最終含量可能需要調整才能達到最佳效果。

3.1用于體內(nèi)測定的D-熒光素的制備
D-熒光素在整個動物體內(nèi)的生物分布是快速且比較容易,但動力學可能依賴于組織。D-熒光素能穿透細胞膜,并能通過血腦屏障、血胎盤屏障和血睪丸屏障。
材料:
•D-熒光素,鉀鹽
•D-PBS(不含Mg2+和Ca2+)
•注射器過濾器0.2µM

每次試驗最好是重新配制每個實驗所需的D-熒光素鉀鹽的量。然而,凍結的庫存也可以使用熒光素溶液(參見上面的儲存和穩(wěn)定性部分)。
1.將D-熒光素溶解在D-PBS中以獲得15或30mg/mL的最終濃度。
2.通過0.2µM過濾器進行殺菌(可選,不需要)。
3.在用10µL/g的身體對每只動物成像前5至15分鐘腹膜內(nèi)或靜脈注射
體重或150至300µg/g體重。為了有足夠甚至過量的基質,我們建議每只小鼠使用3mg D-熒光素(30mg/mL中的100µL)。
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