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測定超氧化物歧化酶(SOD)的活性
Release Time：2020-07-20一、測定超氧化物歧化酶(SOD)的活性實驗簡介
二、測定超氧化物歧化酶(SOD)的活性實驗原理
02 - +02 - + 2H+ H2 02 +02，由于超氧陰離子自由基02的壽命短且不穩定，因此不易直接測定SOD活性，因此使用間接方法。當前有三種常用的方法，包括氯化硝基四氮唑藍(NBT)光化學還原法，焦性沒食子酸自氧化法和化學發光法。本實驗主要介紹光化學還原法。原理是：在蛋氨酸和核黃素存在下，氮藍四唑發生光化學還原反應，生成藍色甲基hydr，藍色甲基blue在560nm處具有最大的光吸收率。
SOD可抑制NBT的光化學還原，其抑制強度與酶活性在一定范圍內成正比。
三，測定超氧化物歧化酶(SOD)的活性實驗所需試劑：
1.50m mol / l pH 7.8的磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）。包含0.1m mol / l EDTA
2.220毫 摩/升甲硫氨酸：稱3.2824克甲硫氨酸,用50毫 摩/升 pH7.8的磷酸緩沖液定溶至100ml（現配現用）。
3.1.25m mol / l氯化硝基四氮唑藍（NBT）溶液（現已制備）：稱量NBT 0.102克，使用溶解50m mol / l pH 7.8的磷酸鹽緩沖鹽水（PBS），并稀釋至100ml。
4.0.033m mol / l核黃素：重2.52m克，用PBS溶解至200ml（儲存于陰涼處）。四，實驗步驟
1.酶溶液的制備：稱取0.5克植物組織，加入2.5ml PBS，研磨并勻漿，然后加入2.5ml PBS并充分混合。上清液在4℃以10000r / min離心15min后為粗酶溶液。適當稀釋一部分上清液，用于酶活性測定。
2.酶活性測定取7個10毫升的小燒杯，3個測試樣品，4個作為對照，根據下表添加試劑：
| 所需試劑 | 試劑用量(ml ) | 最終濃度(比色時) |
| 50毫 摩/升 (PBS)
220毫 摩/升 Met 1.25毫 摩/升 NBT 0.033毫 摩/升核黃素 酶液 總體積 |
4.05
0.3 0.3 0.3 0.05 5.0 |
13毫 摩/升 75µ mol/l 2.0µ mol/l 對照以緩沖液代替酶液 |
3.蛋白質含量的測定
將步驟1的上清液適當稀釋，并通過考馬斯亮藍克-250法測定蛋白質含量。
四，測定超氧化物歧化酶(SOD)的活性實驗結果與計算
SOD活性的單位表示為抑制NBT的光化學還原的50％的酶活性單位?？梢酝ㄟ^計算SOD活性：
SOD總活性=SOD比活性=總SOD活性/總蛋白質濃度
式中: SOD總活性單位：U/克FW,比活力單位：U/m克蛋白，ACK是對照品(光照)的光吸收數值;AE為樣品的光吸收數值;V為樣液總體積,V1為測定時樣品用量,W為樣品克重.
