Trizol(總RNA提取試劑)

產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
Trizol(總RNA提取試劑):Trizol是一種新型的用于細(xì)胞或組織的總RNA提取試劑，BIOFOUNT Trizol采用與Invitrogen TRIzol相似的原理和方法，其顏色、抽提的方法和步驟與后者完全相同。BIOFOUNT Trizol含酚和異硫氰酸胍等物質(zhì)，能迅速裂解細(xì)胞或組織并且滅活核酸酶，保持RNA的完整性。加入氯仿并離心后，溶液形成上清層為水相(無(wú)色)、中間層、下層為有機(jī)相(紅色)。上清層用異丙醇沉淀回收總RNA，中間層用乙醇沉淀回收DNA，下層用異丙醇沉淀回收蛋白。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需要準(zhǔn)備的材料：、試劑：無(wú)水乙醇、氯仿、異丙醇、DEPC處理水等。2、耗材： RNase廣泛存在于人的皮膚上和體液及環(huán)境中，RNase是導(dǎo)致RNA降解的主要物質(zhì)，非常穩(wěn)定。操作時(shí)應(yīng)佩戴一次性口罩、手套、帽子。塑料制品、玻璃和金屬物品、實(shí)驗(yàn)儀器等應(yīng)清除RNase，移液器吸頭、EP管等制品的RNase free處理尤為重要。3、儀器：低溫高速離心機(jī)、低溫冰箱。 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的操作步驟(僅供參考)： 樣品準(zhǔn)備 ⑴貼壁細(xì)胞： ①直接裂解：直接在培養(yǎng)瓶/皿中加入Trizol裂解細(xì)胞，每0cm2面積加ml Trizol，用移液器吹打混勻。 ②胰蛋白酶消化：用無(wú)菌PBS洗滌細(xì)胞后，加入含有0.05～0.25%胰蛋白酶的PBS處理細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞脫離容器壁后，加入含有血清的培養(yǎng)基終止反應(yīng)，將細(xì)胞溶液轉(zhuǎn)移至無(wú)RNase的離心管中，5000～6000g離心5 min，收集細(xì)胞沉淀，去除上清。收集細(xì)胞時(shí)一 定要將細(xì)胞培養(yǎng)液去除干凈，否則裂解不完全，降低RNA收獲率。 ⑵懸浮細(xì)胞：無(wú)需清洗細(xì)胞，直接5000～6000 g離心5 min，收集細(xì)胞。每5×06～07動(dòng)物、植物和酵母細(xì)胞或每07細(xì)菌細(xì)胞加入ml Trizol。 ⑶組織：取新鮮動(dòng)物或者植物組織或者-70℃凍存組織，50～00mg組織在液氮中充分研磨或者加入ml Trizol研磨或者用勻漿器勻漿處理。樣品體積一般不超過(guò)Trizol體積的0%。研磨要迅速，以min為佳。 ⑷血液：取0.5～ ml新鮮或凍存的血液，2000g離心5 min，去除血漿，加入ml Trizol，充分振蕩混勻。 核酸分離：充分振蕩混勻(可以置于低溫/超低溫冰箱凍存5～0 min后，充分振蕩，反復(fù)～3次)，將裂解樣品或勻漿液室溫放置5～0 min，使核蛋白與核酸完全分離。 樣品分層：加入0.2 ml氯仿/ml Trizol，劇烈振蕩5 s，室溫放置2～3 min。置于4℃離心機(jī)，2000 g離心0～5 min。上層為水相，中間層和下層為有機(jī)相，RNA在上層水相。 沉淀RNA：吸取上層水相(約500μl)轉(zhuǎn)移至無(wú)RNase的離心管中(不要吸取任何中間層物質(zhì),否則會(huì)有染色體DNA污染)，加入等體積異丙醇混勻(或者加入.2倍體積BIOFOUNT Trizol專用RNA沉淀液，超低溫冰箱放置2～3hr,可以大大提高RNA回收率），室溫放置5～20 min。2000 g 4℃離心0 min，離心后管側(cè)或管底形成膠狀沉淀，棄上清。 洗滌RNA：加入ml DEPC水配制的75%乙醇/ml Trizol洗滌沉淀(或者加入ml BIOFOUNT Trizol專用RNA洗滌液，可以大大提高RNA純度），室溫放置5～0 min，7500g 4℃離心5 min，棄上清。室溫干燥5～0 min，不宜過(guò)分干燥，否則RNA難以溶解。 溶解RNA：加入30～50ul RNase-free ddH2O充分溶解RNA，-70℃長(zhǎng)期保存或直接用于后續(xù)試驗(yàn)。對(duì)于肝、胰腺、腎等組織中RNase含量高的樣品，沉淀時(shí)用0 0%去離子甲酰胺溶解。 分析與定量： 測(cè)定樣品在260 nm和280 nm的吸收值確定RNA的質(zhì)量。按OD=40pg RNA計(jì)算RNA的產(chǎn)率。OD260/280在.8～2.0視為抽提RNA純度較好。濃度在4μg/ml以上的樣品適于用分光光度計(jì)測(cè)定。 進(jìn)行甲醛變性瓊脂糖電泳，確定RNA的完整性和污染情況。 核酸分析儀測(cè)定RNA的質(zhì)量和純度。 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中注意事項(xiàng)： 、 樣品保存：加入Trizol混勻后，樣品可在-70℃放置～2月；RNA樣品可以在70%酒精中-70℃保存2～4周：如果需要長(zhǎng)期保存，應(yīng)置于超低溫冰箱中保存。 2、 Trizol是強(qiáng)腐蝕性物質(zhì)，污染皮膚或眼睛后，立即用清水或生理鹽水沖洗，必要時(shí)尋求醫(yī)生的幫助。 3、 Trizol可常溫運(yùn)輸，建議保存4℃保存。 4、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 有效期：2個(gè)月有效。