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對染色體R顯帶技術(shù)的介紹
Release Time：2020-07-22一、染色體R顯帶技術(shù)的基本介紹：
※ 染色體R顯帶技術(shù)實驗中，目前尚不完全了解R帶的機制，高溫（80?90℃）處理會引起染色體蛋白質(zhì)的變化，G波段中AT富集區(qū)在高溫下變性并表現(xiàn)出特殊的染料親和力，但在R波段，AT富集區(qū)卻不表現(xiàn)出染料親和力，因此會出現(xiàn)淺色區(qū)域，通過電子顯微鏡的觀察進一步表明，這些帶與帶間區(qū)域之間的差異主要是由于電子密度的差異，由R帶顯示的深帶和淺帶區(qū)域與G帶的帶區(qū)域相對，即，G帶的深染色區(qū)域的R帶為淺色區(qū)域，反之亦然。
※ 由于此技術(shù)顯示的深度和淺帶模式與G波段正好相反，因此稱為反向G波段，因此也稱為R波段。G波段染色體的兩端均未顯示深色，而R波段則顯示為深色。因此，R帶對于確定染色體的長度和末端區(qū)域的結(jié)構(gòu)變化是有用的。
二、染色體R顯帶技術(shù)所需的材料及試劑：
胸腺嘧啶核苷、5-溴脫氧尿嘧啶核苷（BrdU）、吖啶橙工作液、秋水仙素、Hank溶液、Hoechst-33258工作溶液、磷酸鹽緩沖液、Giemsa稀釋液、Earle溶液、離心管、離心機。
三、染色體R顯帶技術(shù)的實驗步驟
1.在常規(guī)外周血培養(yǎng)72小時后進行標(biāo)本制備，然后，加入胸腺嘧啶核苷使終濃度為0.3μg/ ml，并繼續(xù)培養(yǎng)17小時。
2.在無菌條件下，用Hank溶液洗滌兩次以除去殘留的胸苷溶液，然后將外周血培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到另一個新鮮的培養(yǎng)液中，同時加入5-溴脫氧尿嘧啶核苷（BrdU），使生長培養(yǎng)基的最終濃度為10μg / ml，并將其在37°C的黑暗環(huán)境中放置5小時。
3.培養(yǎng)終止：按照常規(guī)的外圍培養(yǎng)量加入秋水仙素，并在37°C下繼續(xù)培養(yǎng)2至4小時，然后根據(jù)常規(guī)培養(yǎng)進行離心，低滲，固定和制片。
4.制作R帶時，將載玻片放在Hoechst-33258工作溶液中20分鐘，或在吖啶橙工作液中染色5分鐘，然后用pH 6.8磷酸鹽緩沖液沖洗兩次。
5.將樣品放在恒溫水浴中的電加熱金屬板上，然后用pH = 6.8的磷酸鹽緩沖液覆蓋玻璃載玻片，使液體在約45度的恒溫下保存。
6.使用垂直于玻璃載玻片的8 W紫外燈，其上覆蓋pH = 6.8磷酸鹽緩沖溶液。燈泡和載玻片之間的距離約為5厘米。照射15-20分鐘，然后用蒸餾水沖洗兩次。
7.將玻片浸入86℃的Earle溶液中1?2分鐘，然后用蒸餾水洗滌兩次并冷卻。
8.用1:20 Giemsa稀釋液染色10分鐘，然后干燥。
9.顯微鏡檢查和核型分析：用低倍顯微鏡觀察并計數(shù)到油鏡，然后選擇分裂相。顯微照相后，根據(jù)R波段染色體的特征進行分析以檢測異常。
四、染色體R顯帶技術(shù)注意事項：
1.染色體玻片不能用火干燥，但只能自然干燥以獲得更好的結(jié)果。
2. R錄像帶的生產(chǎn)不需要經(jīng)過高溫干燥，并且存儲時間不會太長。
3.紫外線燈的照射時間與伯液處理時間成反比。如果紫外線燈的照射時間較長，則在Earle溶液中的處理時間會較短。
五、染色體R顯帶實驗所需的試劑清單：
| 序列 | 產(chǎn)品名 | 貨號 | CAS | 備注 |
| 1 | Hanks平衡鹽溶液(含酚紅) | HC1153 | ||
| 2 | β-胸苷 | SS0954 | 50-89-5 | |
| 3 | 磷酸鹽緩沖液 | HC1488 | ||
| 4 | 秋水仙素?zé)晒馑?/span> | BSH87942 | 66091-34-7 | |
| 5 | 吉氏色素 | SX0115 | 51811-82-6 | |
| 6 | 2ml圓底連蓋離心 | F-EP020 | ||
| 7 | 1.5ml尖底連蓋離心管 | F-EP015 | ||
| 8 | Hoechst-33258工作溶液 | HXH500950 | 23491-45-4 | |
| 9 | 5-溴脫氧尿嘧啶核苷（BrdU） | SS0879 | 59-14-3 | |
| 10 | 吖啶橙 | LSH65851 | 494-38-2 | |
| 11 | Earle’s平衡鹽溶液(無鈣鎂糖酚紅) | HC1154 |
