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如何做Southern雜交實驗
Release Time：2020-07-22一、Southern雜交實驗的基本介紹：
Southern雜交實驗是分子生物學最經典的實驗方法之一。Southern雜交實驗的基本原理是，需要將檢測的DNA樣品固定在固相的載體之上，然后再與標記好的核酸探針進行雜交，并與探針具有同源序列的固相DNA位置，顯示出交叉信號。 Southern雜交實驗可以確定出來是否有與探針同源的片段以及檢測到的DNA樣品中片段的長度。某些Southern雜交技術被廣泛應用于遺傳疾病的檢測過程中、DNA指紋檢測分析、以及PCR產物判斷中。但由于Southern雜交技術的操作繁瑣而且耗時長，因此，目前已經有其他更加具備效率的實驗方法可以替代Southern雜交實驗技術。但該技術也具有其獨特的實用性和普及性，無法通過其他方法進行代替，例如片段多態(tài)性檢測（RFLP）。
二、Southern 雜交實驗所需材料及試劑：
①實驗變性溶液：0.5M的 NaOH； 1.5 M的氯化鈉。
②實驗中和溶液：1.5M氯化鈉; 1M Tris-HCl（pH 7.4）；
③試驗用轉移溶液（20×SSC）：NaCl 175.3g；NaOH調節(jié)pH值至7.0，檸檬酸三鈉82.2g，加入ddH2O至1000ml。
④過濾用的一次性有機系針頭濾器 尼龍(NY)膜 13mm 0.22um(綠）
二、Southern 雜交實驗步驟
Ⅱ、基因組DNA消化產物的瓊脂糖凝膠電泳
Ⅲ、DNA從瓊脂糖凝膠轉移到固體支持物
①堿變性：在室溫下將凝膠浸入數(shù)倍于變性溶液體積的凝膠中30分鐘。
②中和：將凝膠轉移到中和溶液中15分鐘。
③根據(jù)凝膠的大小轉移切割NC膜或尼龍膜，并切掉一個角作為標記。浸入水中后，將其浸入轉移溶液中5分鐘。切一張長為3mm的Whatman濾紙，將其稍稍寬于膜作為鹽橋，然后壓緊（轉移過程通常需要8-24小時，每隔幾個小時更換一次濕紙巾。將轉移液切成20的大小×凝膠3-5張濾紙和大量紙巾備用SSC。注意在膜和膠之間不應有氣泡，在整個操作過程中，要防止膜污染其他污垢。
④轉移后，取出NC膜，將其浸入6×SSC溶液中幾分鐘，以洗去膜上污染的凝膠顆粒，將其置于兩張濾紙之間，在80°C下烘烤2小時，然后將其夾在中間兩層濾紙之間的NC膜，保存在干燥的地方。
Ⅳ、探針標記
1. 用于Southern雜交的探針，通常采用放射性物質標記或用地高辛標記。重復標記靈敏度高，效果好；地高辛標記的有點在于沒有半衰期，同時具備良好的安全性。
2. 探針標記方法包括：隨機引物法，上翻譯法以及末端標記法。
五、Southern 雜交實驗所需試劑清單：
| 序列 | 產品名 | 貨號 | CAS號 | 備注 |
| 1 | Nacl | JT0001 | 7647-14-5 | |
| 2 | Agarose | SF0014 | 9012-36-6 | |
| 3 | NaOH | JT8650 | 1310-73-2 | |
| 4 | 一次性有機系針頭濾器 尼龍(NY)膜 13mm 0.22um(綠） | F-NY1322 |
